问问题描述
PCWS是什么意思希望能解答下
答精选答案
是说95度几分钟然后缓慢降温到室温那种吗？这种缓慢降温程序通常用于核酸单链合成双链用的。降温太快，很容易形成单链内部的二级结构。一般而言，越长的单链，降温速度就要越慢。比如说，合成CRISPR用的小gRNA，两条DNA oligo也就20+个碱基，这时降温速度可以设为5度/分钟。而像60-70 nt的DNA单链要杂交成双链，我会用1度/分钟。
过去一些做分子多态的老旧技术，比如PCR-SSCP，就会反其道而行，在高温变性PCR产物后直接插冰上迅速降温，使得DNA单链内部形成二级结构，再去跑PAGE胶看带型。
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本文概览：是说95度几分钟然后缓慢降温到室温那种吗？这种缓慢降温程序通常用于核酸单链合成双链用的。降温太快，很容易形成单链内部的二级结构。一般而言，越长的单链，降温速度就要越慢。比如说，合成CRISPR用的小gRNA，两条DNA oligo也就20+个碱基，这时降温速度可以设为5度/分钟。而像60-70 nt的DNA单链要杂交成双链，我会用1度/分钟。过去一些做分子多态的老旧技术，比如PCR-SSCP，就会反其道而行，在高温变性PCR产物后直接插冰上迅速降温，使得DNA单链内部形成二级结构，再去跑PAGE胶看带型。