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western blot电泳原理希望能解答下
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(本实验以转移到PVDF膜,辣根过氧化物酶HRP-ECL发光法为例)在SDS-聚丙烯酰胺凝胶电泳(SDS-PAGE)中,不连续系统的凝胶包括浓缩胶(spacergel)和分离胶(separation gel),蛋白质在浓缩胶中运动到两层凝胶的交界处时,由于凝胶孔径的不连续性使样品迁移受阻而压缩成很窄的区带,即不连续系统的浓缩效应。
在凝胶中,分子量小的蛋白质泳动速度快,分子量大的蛋白质泳动速度慢,即聚丙烯酰胺凝胶的分子筛效应。阴离子去污剂SDS使蛋白质变性,消除不同蛋白分子间的电荷差异和结构差异,使得蛋白质在电场中的泳动速度仅与蛋白质颗粒大小有关。各种蛋白质在不连续SDS-PAGE的浓缩效应和分子筛效应的作用下,按照分子量大小以一定顺序排列形成一个个区带。
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本文概览:(本实验以转移到PVDF膜,辣根过氧化物酶HRP-ECL发光法为例)在SDS-聚丙烯酰胺凝胶电泳(SDS-PAGE)中,不连续系统的凝胶包括浓缩胶(spacergel)和分离胶(separation gel),蛋白质在浓缩胶中运动到两层凝胶的交界处时,由于凝胶孔径的不连续性使样品迁移受阻而压缩成很窄的区带,即不连续系统的浓缩效应。在凝胶中,分子量小的蛋白质泳动速度快,分子量大的蛋白质泳动速度慢,即聚丙烯酰胺凝胶的分子筛效应。阴离子去污剂SDS使蛋白质变性,消除不同蛋白分子间的电荷差异和结构差异,使得蛋白质